Indução e Modulação de Resposta Inflamatória em Frangos pela Citotoxina ECVF Produzida por E. coli Isolada de Celulite Aviária
M. R. Salvadori
L. M. B. Santos
T. Yano
Introdução
Celulite refere-se a um processo inflamatório do tecido subcutâneo, comumente observada na região abdominal e coxa de aves e mamíferos. Recentemente descrevemos uma nova citotoxina denominada E. coli vacuolating factor (ECVF) produzida por E. coli isolada de celulite aviária (3) que induz vacuolização celular em células de origem aviária. O objetivo deste trabalho foi estudar o papel da citotoxina ECVF no processo inflamatório da celulite, determinando seu mecanismo de indução e modulação da resposta inflamatória em frangos e camundongos.
Materais e Métodos
A citotoxina ECVF foi obtida da amostra de E. coli C78 (O78) isolada de celulite aviária segundo a metodologia descrita por Salvadori et al (3). Frangos de 30 dias de idade (Leghorn) e camundongos de 5 semanas de idade (BALB/c) foram inoculados intravenosamente com 1ml e 0.5ml respectivamente de ECVF, o sangue dos animais foi coletado em vários intervalos de tempo para a obtenção dos soros. A detecção de citocina inflamatória TNF-a foi realizada através de Kit de ELISA específico para camundongos (Cytoscreen, Biosource
International) em soro de camundongos; e bioensaio em linhagem de células WEHI164 clone13 sensíveis a liberação de TNF em soro de frangos. A detecção de citocina anti- inflamatória IL-10 foi realizada através de Kit de ELISA específico para camundongos (Cytoscreen, Biosource International) em soro de camundongos.
Resultados e Discussão
A citotoxina ECVF produzida por E. coli isolada de celulite aviária estimula a liberação de citocina inflamatória (TNF) em uma relação tempo-dependente, no soro de frangos e camundongos.
A cinética de liberação de TNF em frangos inoculados com a ECVF (Tabela 1) foi similar ao desenvolvimento das lesões de celulite em aves quando inoculadas com E. coli (aproximadamente 18 horas após inoculação) em trabalhos de reprodução experimental desta doença (2). A não disponibilidade de Kits para a dosagem de citocinas de origem aviária, levou-nos a utilizar o soro de camundongos para a confirmação de nossos resultados obtidos em bioensaios com soro de frangos (Tabela 2) e também para estudar o mecanismo
de modulação da resposta inflamatória induzida pela ECVF, baseado no fato de que existem relatos de homologia existente entre citocinas de mamíferos e aves (1).
Pudemos neste trabalho elucidar o mecanismo da resposta inflamatória induzida pela ECVF, que é modulada em um mecanismo de feedback tempo-dependente entre a liberação de citocina inflamatória TNF e anti-inflamatória IL-10 (Tabela 3).
O estudo da resposta inflamatória in situ em frangos induzida pela ECVF está ainda em fase de experimentação em nosso laboratório.
Conclusão
Concluímos que a resposta inflamatória induzida pela ECVF sugere a sua participação no desenvolvimento da patogenia da celulite aviária produzida por E. coli.
Tabela 1. Liberação de citocina inflamatória (TNF-a) induzida pela ECVF em frangos.
Experimentos foram realizados em duplicata.*Desvio padrão da quantificação da citocina TNF
Tabela 2. Liberação de citocina inflamatória (TNF-a) induzida pela ECVF em camundongos.
Experimentos foram realizados em duplicata.*Desvio padrão da quantificação da citocina TNF
Tabela 3. Liberação de citocina anti-inflamatória (IL-10) induzida pela ECVF em camundongos
Experimentos foram realizados em duplicata.*Desvio padrão da quantificação da citocina IL-10
Bibliografia
1. Kogut MH. Avian Pathology 2000; 29:395-404.
2. Norton RA, Bilgili SF, Mcmurtrey BCA, Avian Disease 1997; 41:422-428.
3. Salvadori MR, Yano T, Carvalho HF, Parreira VR, Gyles CL. Avian Disease 2001; 45:43-51.
